Реакция торможения миграции лейкоцитов

Одним из способов оценки функциональной способности сенсибилизированных лимфоцитов и продуцируемых ими лимфокинов является реакция торможения миграции макрофагов и лейкоцитов. Определение фактора, ингибирующего миграцию макрофагов и лейкоцитов, широко применяется при хронических заболеваниях органов пищеварения для выявления повышенной чувствительности замедленного типа к антигенам различной специфичности.

С помощью данного теста можно выявить наличие специфи­ческой сенсибилизации, определить ее интенсивность. Фак­тор, угнетающий миграцию клеток, относится к гликопротеидам с молекулярной массой 12 000 — 80 000. При стимуля­ции сенсибилизированных лимфоцитов его продукция резко возрастает.

При постановке реакции торможения миграции лейко­цитов (РТМЛ) клетки, выделенные из гепаринизирован-ной венозной крови, помещают в капилляр, из которого в процессе инкубации происходит миграция макрофагов или лейкоцитов в питательную среду. В присутствии антигена, к которому сенсибилизированы лимфоциты, последние вы­рабатывают фактор, тормозящий миграцию лейкоцитов. Ингибицию миграции выражают в процентах или индексе, для чего вычисляют площадь миграции в присутствии ан­тигена и без него (контроль). В настоящее время при­меняют различные модификации РТМЛ — в микрока­пиллярах, в агарозе, причем последняя весьма чувстви­тельна.

Хронические заболевания органов пищеварения сопро­вождаются торможением миграции лейкоцитов при дейст­вии антигенов различной специфичности — вирусных, бак­териальных, тканевых. Угнетение миграции лейкоцитов периферической крови наблюдается при активных хрони­ческих заболеваниях печени (табл. 1). Ингибирующий эф­фект оказывают суммарный антиген печени, различные структурные компоненты, биохимические фракции печени и желчных протоков — мембраны, митохондрии, ядра, бел­ковые фракции желчи и печени, липопротеиды, микросомы и др. Выраженное торможение миграции лейкоцитов пери­ферической крови при разных формах хронического актив­ного гепатита и цирроза печени вызывает антиген вирусно­го гепатита В (рис. 4, 5). По нашим данным, ингибирую­щий эффект НВ8-антигена наблюдался у 44 — 73% боль­ных активным хроническим гепатитом и циррозом печени, индекс миграции 0,65 — 0,35. Угнетающее действие НВ8-антигена отмечалось у 73% больных с персистенцией НВ8-антигена и у 48 % без таковой. Многие авторы отме­чали торможение миграции лейкоцитов при действии НВs-антигена. Однако четкой корреляции между ингибирующим эффектом антигена и активностью заболевания выя­вить в большинстве случаев не удается. Наряду с этим некоторые исследователи подчеркивают более тяжелое те­чение заболевания у больных с положительной реакцией на НВд-антиген.

Торможения миграции лейкоцитов

Значительным ингибирующим эффектом при хронических заболеваниях печени обладает специфический белок печени, липопротеид мембран гепатоцитов. В хронизации патологического процесса определяющая роль, по мнению многих исследователей, принадлежит иммунным реакциям, опосредованным Т-лимфоцитами и направленным против специфического липопротеида печени. Для первичного билиарного цирроза, склерозирующего холангита характерно торможение миграции лейкоцитов при действии антигенов митохондрий, мембран гепатоцитов, формирующих желчные канальцы, эпителия желчных протоков, белковых фракций желчи. Сенсибилизация к перечисленным антигенам может быть обусловлена действием вирусов, бактерий, имеющих с ними общие антигенные детерминанты. Ингибирующий эффект на миграцию лейкоцитов оказывает гиалин при алкогольных поражениях печени [McFarlane J. et al., 1979J.

Положительный феномен РТМЛ при действии антиге­нов ткани поджелудочной железы, инсулина, трипсина наблюдается при хроническом панкреатите. У 80 % боль­ных атрофическим гастритом и у 50 % больных язвенной болезнью желудка, 12-перстной кишки ингибирующее дей­ствие оказывали антиген, экстрагированный из слизистой оболочки желудка, микросомная фракция, а также дигестивные гормоны — гастрин, секретин, панкреозимин и др. Антигены слизистой оболочки тонкой и толстой кишки тормозят миграцию лейкоцитов периферической крови при болезни Крона. Среди больных язвенным колитом поло­жительная РТМЛ с антигенами белковых фракций из тка­ни толстой кишки отмечалась у 93%, тонкой — у 86% и с антигеном кишечной палочки — у 71%. При болезни Крона ингибирующий эффект перечисленных антигенов вы­ражен слабее и в меньшем проценте случаев (39, 50 и 26 соответственно). Интересно, что положительная РТМЛ с указанными антигенами наблюдалась и при циррозе пече­ни. Видимо, нарушение механизмов элиминации антигенов поврежденной печенью приводит к сенсибилизации лим-фоидной ткани. При целиакии положительная РТМЛ наб­людается при действии пищевых антигенов (бычьего сы­вороточного альбумина, белков коровьего молока, яично­го белка, глютена, а-глиадина). При этом интенсивность иммунных реакций коррелирует со степенью повреждения слизистой оболочки тонкой кишки по данным энтеробиопсии [Scott H. et. al., 1984].

Действие специфических тканевых антигенов вызывает торможение миграции не только клеток периферической крови, но и культуры ткани тонкой кишки. Анализ результатов ингибирующего влияния различных тканевых антигенов (суммарных тканевых гомогенатов, мембранных, цитоплазматических — митохондриальных, микросомальных, ядерных) весьма труден, так как полу­ченные результаты довольно противоречивы. Это вполне естественно в связи с тем, что исследователи использовали приготовленные разным способом, различные в биохими­ческом и структурном отношении антигены, так же как и лейкоциты больных с различной активностью процесса, продолжительностью заболевания, формой поражения ор­ганов пищеварения, иммунокорригирующей терапией.

При помощи РТМЛ в пятиканальных капиллярах и под агарозу мы установили, что хронические заболевания ор­ганов пищеварения сопровождаются угнетением спонтан­ной миграции лейкоцитов периферической крови у 52-75 % больных. Степень угнетения спонтанной миграции лейкоцитов зависит от характера заболевания, формы по­ражения и активности патологического процесса. Макси­мальное снижение миграционной активности лейкоцитов наблюдается при первичном билиарном циррозе, аутоим­мунном (люпоидном) гепатите, язвенном колите. Опреде­ление спонтанной миграционной активности лейкоцитов в отсутствие антигенов позволяет судить о состоянии естест­венной резистентности организма, его защитных силах, функциональной способности фагоцитирующих клеток и может служить одним из показаний к применению иммуномодулирующей терапии. Положительный феномен тор­можения миграции лейкоцитов при действии тканевых ан­тигенов свидетельствует о наличии специфической сенси­билизации, что имеет определенное диагностическое зна­чение.

Кожные реакции

Исследование реакций клеточного им­мунитета осуществляется в условиях in vitro и in vivo. Одним из методов оценки способности организма к разви­тию повышенной чувствительности замедленного типа яв­ляется кожная реакция с такими веществами, как динитро-хлорбензол (ДНХБ), стрептокиназа и др. Положительные кожные реакции в виде эритемы, гиперемии, папулы, наб­людаемые у здоровых лиц через 24 ч после введения пере­численных веществ, свидетельствуют о достаточной функ­циональной способности. Слабо выраженные и отрицатель­ные кожные пробы могут указывать на угнетение функцио­нальной активности Т-лимфоцитов. При хронических бо­лезнях органов пищеварения в ряде случаев наблюдается угнетение кожной реактивности к ДНХБ, бактериальным и грибковым аллергенам — при болезни Крона, язвенном колите. Снижение кожной чувствительности к неспецифи­ческим агентам отмечено при хроническом гепатите, цир­розе печени, внепеченочной закупорке. Корреляция между реакцией на ДНХБ, степенью тканевого поражения, тя­жестью заболевания и содержанием циркулирующих Т-лимфоцитов в основном не определяется.

Кожные тесты применяют для выявления повышенной чувствительности замедленного и немедленного типа к ан­тигенам различной специфичности. Развивающиеся в от­вет на введение бактериальных, химических и тканевых аллергенов кожные реакции, опосредованные Т-лимфоцитами, характеризуются поздним возникновением — через несколько часов, с максимумом развития к 24—48 часам, образованием характерной папулы на коже, мононуклеарной инфильтрацией, преобладанием пролиферативных про­цессов над экссудативными. Кожные пробы с бактериаль­ными, грибковыми и другими аллергенами являются од­ним из методов аллергической диагностики и служат для выявления инфекционной аллергии при заболеваниях же­лудочно-кишечного тракта, в частности при болезни Кро­на, язвенном колите. У больных целиакией описаны поло­жительные внутрикожные тесты типа феномена Артюса с фракциями глютена, достигающие максимума через 8 ч после введения.

Отрицательные кожные реакции замедленного типа у больных могут быть проявлением общего неспецифическо­го угнетения иммунной реактивности либо результатом неспособности продуцировать в достаточном количестве кожно-реактивный, митогенный и хемотаксический факто­ры, мобилизовать и активировать с их помощью интактные лимфоциты.

Иммунные реакции, опосредованные Т-лимфоцитами

Преимущественное развитие иммунных реакций по гумо­ральному или клеточному типу в значительной степени определяется характером антигена, его дозой, химической структурой, физическими и биологическими свойствами. В развитии клеточно-опосредованных или гуморальных форм иммунного ответа имеют значение такие факторы, как при­сутствие антигена в связанной с клетками форме, распоз­навание с включением антигенов класса ГКГ, участие регуляторных Т-лимфоцитов и др. Иммунные реакции замед­ленного типа индуцируются преимущественно вирусными, бактериальными, паразитарными и тканевыми антигена­ми. Индукторами указанных реакций являются также трансплантационные антигены, ответственные за несовмес­тимость тканей при их пересадке, некоторые лекарствен­ные препараты, растительные и низкомолекулярные хими­ческие вещества и др.

Важнейшей особенностью этого типа гиперчувствитель­ности является замедленное течение. Они развиваются в сенсибилизированном организме в течение нескольких ча­сов и даже дней после контакта с антигеном. За это время происходит специфическое взаимодействие сенсибилизи­рованных Т-лимфоцитов с аллергеном. Местные проявле­ния при повышенной чувствительности замедленного типа отличаются от таковых при аллергии немедленного типа не только замедленным временем развития, но и гистоло­гической картиной. При повышенной чувствительности не­медленного типа формируется очаг серозно-экссудативного воспаления, клеточную основу которого составляют по­лиморфно-ядерные лейкоциты, в то время как при реакци­ях замедленного типа преобладает инфильтрация лимфоци­тами, моноцитами [Серов В. В., Шехтер А. Б., 1981].

Аллергические реакции замедленного типа, опосредуе­мые Т-лимфоцитами, по сравнению с антителогенезом характеризуются более ранним фило-и онтогенетическим развитием, имеют свои особые механизмы. Повышенная чувствительность замедленного типа не связана с циркули­рующими антителами и поэтому не может быть перенесе­на сывороткой сенсибилизированного организма интактному. Специфическая десенсибилизация при повышенной чувствительности замедленного типа, как правило, не эф­фективна [Медуницын Н. В., 1983].

Контроль и регуляция иммунного ответа

В соответст­вии с теорией взаимодействующей сети иммунный ответ представляет собой биологический феномен, обусловлен­ный направленной дифференцировкой лимфоидных клеток под влиянием антигенов. Возникновение, развитие и завер­шение иммунного ответа, его кинетика являются результа­том взаимодействия многих клеточных систем и биологи­чески активных веществ [Nossal G., 1984]. В процессе им­мунного ответа происходят сложные взаимодействия, ко­торые контролируются генными продуктами ГКГ. При этом имеют значение Т-лимфоциты с иммунорегуляторными свойствами, ограничение по ГКГ, сцепленные с ГКГ Ir-гены и др. В регуляцию вовлекаются разные антигены, экспрессированные на иммунокомпетентных клетках, в том числе la-антигены, кодируемые генами I класса ГКГ [Erb P., 1984]. Иммунный ответ контролируется генами ва­риабельных областей иммуноглобулинов и ГКГ. Регуля­ция иммунного ответа подразумевает как его усиление, так и ослабление. В регуляции иммунных реакций имеют значение Т-хелперы, Т-супрессоры, продуцируемые Т-клетками медиаторы, идиотип-антиидиотипическое взаимодей­ствие клеток с иммуноглобулинами или их фрагментами. Образование антиидиотипа имеет важное значение в регу­ляции продукции антител, в том числе и аутоантител. Су­ществует и нейроэндокринный контроль иммунного ответа.

Взаимосвязь между генами, молекулами и клетками обеспечивает гомеостатическое равновесие в иммунной си­стеме. В регуляции иммунного ответа Т-лимфоциты игра­ют важную роль благодаря своей способности распозна­вать антиген и взаимодействовать с разнообразными клет­ками— эффекторами. Под влиянием генетически чужеродных антигенов Т-лимфоциты трансформируются в бластные клетки, генерирующие поколения стимулированных антигенчувствительных эффекторных клеток, осуществля­ющих киллерную функцию, принимающих участие в раз­витии гиперчувствительности замедленного типа, некото­рых форм аутоиммунитета.

Признание ключевой роли Т-супрессоров в гомеостазе иммунной системы и толерантности к чужеродным и аутологичным антигенам предполагает, что нарушение супрессорной активности может способствовать развитию пато­логических процессов — инфекционных, аутоиммунных, опухолевых и др. в органах пищеварения. При острых и хронических инфекциях, вызванных разнообразными мик-организмами, происходит усиление активности неспецифи­ческих Т-супрессоров, способствующее снижению иммун­ной реактивности. Кроме того, при бактериальных инфек­циях могут выделяться токсические продукты микробного происхождения, способные поражать лимфоидную ткань, угнетать иммунные процессы. При отсутствии со стороны супрессоров контроля взаимоотношений «хозяин-пато­генный агент» иммунный ответ на инфекционное раздра­жение может принять характер чрезвычайно интенсивной неконтролируемой воспалительной реакции с повреждени­ем собственных тканей. Нарушение функциональной актив­ности иммунной системы влечет за собой опасность воз­никновения многих заболеваний. К иммунопатологическим реакциям, механизм которых опосредуется Т-лимфоцита-ми и их медиаторами, относятся аутоаллергические реак­ции замедленного типа, лимфопролиферативные, опухоле­вые процессы и др. Механизмы иммунных реакций, реали­зуемых Т-лимфоцитами, играют важную роль в развитии повышенной чувствительности замедленного типа к бакте­риальным, вирусным, грибковым, паразитарным и другим антигенам при соответствующих инфекциях.

Изменение функции Т-лимфоцитов лежит в основе мно­гих патофизиологических механизмов нарушений иммун­ной системы. При этом имеет значение как повышение, так и снижение функциональной активности Т-лимфоцитов.

Поделитесь в социальных сетях:

Добавить комментарий

Ваш e-mail не будет опубликован. Обязательные поля помечены *