Иммунодиагностика болезней органов пищеварения

Иммунологические методы нашли широкое применение в клинике внутренних болезней, в том числе болезней ор­ганов пищеварения с целью совершенствования дифференциальной диагностики, выявления этиологического факто­ра, определения активности процесса, показаний к приме­нению иммунокорригирующей терапии и ее эффективнос­ти [Адо А. Д., 1976; Косяков П. Н., 1979; Петров Р. В. и др., 1984]. В решении указанных задач важная роль принадлежит таким методам, как иммунодиффузия, иммуноэлектрофорез, иммунофлюоресценция, иммуноферментный, радиоиммунный, радиоаллергосорбентный, розеткообразование, бластная трансформация лимфоцитов, тормо­жение миграции, адгезия лейкоцитов, и др., используют также методы ультрацентрифугирования, гельфильтрации, хроматографии, электроизофокусирования, электронной микроскопии и др.

Новые возможности для исследования реакций специ­фического иммунитета и естественной резистентности при болезнях органов пищеварения открывает гибридомная биотехнология, метод моноклональных антител. В настоя­щее время получены моноклональные антитела, продуцен­тами которых являются клонированные клетки гибридом, к мембранным антигенам различных типов клеток (лим­фоцитов, макрофагов, клеток Купфера, гепатоцитов и др.К к антигенам системы HLA, вирусов, опухолей, гаптенам, гормонам и др. Как диагностические реагенты, моноклональные антитела применяют для типирования клеток крови и тканей, идентификации микроорганизмов, онкофетальных и дифференцировочных антигенов, картирова­ния генов и т. д.

Иммунодиагностика хронических болезней печени

Для подтверждения вирусной природы хронического гепатита и цирроза печени большое значение имеет обнаружение антигенов вирусного гепатита В, его HBS-, HBC— и НВе-компонентов как в периферической крови, так и непосред­ственно в ткани печени методами иммунопреципитации, встречного иммуноэлектрофореза, иммунофлюоресценции, иммуноферментным, радиоиммунным, моноклональных ан­тител и др. Поверхностный НВ8-компонент антигена ви­русного гепатита В обнаруживается примерно у 35 % больных хроническим гепатитом и у 15 % больных цирро­зом печени, в то время как НВе-компонент антигена, сви­детельствующий о репликации вируса в организме, выяв­ляется менее чем у 30 % НВ8-антигенсеропозитивных боль­ных. Вирусные поражения печени с персистенцией НВ8-и НВе-антигена характеризуются комплексом иммунных нарушений, включающих умеренное пропорциональное (в l’Va — 2 раза) увеличение содержания основных классов иммуноглобулинов (A, G, М), резкое повышение концент­рации IgE и циркулирующих иммунных комплексов. Аутоантитела к субклеточным структурам IgG и IgM (к ядер­ному веществу, гладкой мускулатуре, эндотелию сосудов) выявляются относительно редко и в невысоких титрах (не более 30 %, средний титр 1 : 20). Антитела к глобули­ну (ревматоидный фактор) обнаружены лишь в 5,8 % слу­чаев, а антитела к альбумину — в единичных случаях.

Рис.  30.  Протеинограмма  донора   (слева)   и   больного   активным циррозом   печени   (справа).
Рис. 30. Протеинограмма донора (слева) и больного активным циррозом печени (справа).

При НВ8-антигенсеронегативных вирусных поражениях печени более выражено увеличение содержания IgG, рев­матоидного фактора, аутоантител к ядерным и мембран­ным антигенам клеток, актину, микросомам. В ряде слу­чаев выявляются антитела к компонентам НВ-антигена. Со стороны иммунокомпетентных клеток отмечается уме­ренное снижение общего числа лимфоцитов, Т-лимфоцитов, угнетение их розеткообразующей, пролиферативной, митотической, супрессорной активности, повышение хелперной, лимфокинпродуцирующей способности. БТЛ при дей­ствии митогенов угнетена, в то время как под влиянием НВ3-антигена и специфических антигенов печени она уве­личена. Спонтанная миграция лейкоцитов периферической крови снижена, так же как и адгезивная, фагоцитарная активность иммунокомпетентных клеток. Чувствительность Т-лимфоцитов к действию специфических антигенов в РТМЛ при вирусных поражениях печени увеличена.

Аутоиммунный (люпоидный) гепатит сопровождается интенсивным повышением содержания y-глобулинов, ос­новных классов термостабильных и термолабильных им­муноглобулинов, прежде всего IgG, крио- и пироглобули-нов, циркулирующих иммунных комплексов (рис. 30). Для данной формы гепатита характерна высокая частота обнаружения антинуклеарных и гладкомышечных антител, аутоантител к антигенам мембраны гепатоцитов, ревмато­идного фактора [Логинов А. С. и др., 1980; Berg Р., 1982; Storch W., 1982].

При холестатических поражениях печени (первичный билиарный цирроз, его предстадия — хронический холестатический гепатит, активный цирроз печени с холестазом и вторичный билиарный цирроз) на первый план выступа­ет резкое возрастание концентрации IgM. Аб­солютная и относительная макроглобулинемия максималь­но выражена при первичном билиарном циррозе, так же как и повышение содержания митохондриальных аутоанти­тел, криоглобулинов, ревматоидного фактора, циркулиру­ющих иммунных комплексов, парапротеинов. Концентра­ция СЗ- и С4-компонентов комплемента снижена.

При дифференциальной диагностике первичного билиарного цирроза и аутоиммуного гепатита некоторые иссле­дователи предлагают выделять большие и малые крите­рии, способствующие более точной диагностике. К боль­шим диагностическим критериям первичного билиарного цирроза относятся выявление антимитохондриальных аутоантител в титре 1 :20 и выше, деструктивное поражение желчных путей по данным пунктата. Малые критерии включают зуд кожи, желтуху, увеличение содержания ще­лочной фосфатазы (в 2 раза и более), IgM (свыше 3 г/л).

Большими диагностическими критериями аутоиммунно­го гепатита служат наличие в сыворотке антинуклеарных и гладкомышечных антител (диагностический титр 1 :20 и выше), очаговые некрозы в ткани печени. Малые кри­терии: астенизация, желтуха, увеличение активности трансаминаз (в 3 раза), содержания у-глобулинов, IgG (более 20 г/л). Компоненты НВ8-антигена при данных заболева­ниях, как правило, не определяются, хотя антитела к НВ3-антигену в единичных случаях встречаются.

Реактивность Т-лимфоцитов к антигенам печени (спе­цифическому белку печени, митохондриям, эпителию желч­ных канальцев и др.) повышена по данным РБТЛ и РТМЛ с соответствующими антигенами. Неспецифическая розеткообразующая, миграционная, фагоцитарная активность иммунокомпетентных клеток угнетена, так же как и кож­ная чувствительность к ДНХБ, стрептокиназе и др.

Существенное возрастание содержания IgE и IgA, особенно его димерной и секреторной форм, наблюдается при алкогольных поражениях печени, прежде всего в стадии активного цирроза [Логинов А. С. и др., 1978; Pelletier G. et al., 1982]. Алкогольные поражения печени соп­ровождаются повышенной циркуляцией антибактериальных антител (в частности, к кишечной палочке). Методом иммунофлюоресценции обнаруживаются антитела к антиге­нам мембраны гепатоцитов, поврежденных этанолом [Anthony R. et al., 1983]. Концентрация циркулирующих иммунных комплексов в IV2 —2 раза выше, чем у здоро­вых лиц. Аутоантитела, моноклональные иммуноглобули­ны, а-фетопротеин выявляются крайне редко [Gluud С. et al., 1983]. Неспецифическое угнетение функциональной активности иммунокомпетентных клеток (лимфоцитов, фагоцитов) выражено умеренно, так же как и снижение СЗ-, С4-компонентов комплемента, фактора В.

При злокачественных новообразованиях печени (гепaтоцеллюлярный, холангиогенный и метастатический рак печени) преобладает увеличение содержания IgA, макси­мально выраженное при гепатоцеллюлярном раке. Биоло­гическим маркером последнего является а-фетопротеин, постоянно обнаруживаемый в сыворотке периферической крови данной группы больных. Для диагностики гепатоцеллюлярного рака можно использовать тест торможения адгезии лейкоцитов [Onji M., 1984]. У больных циррозомраком отмечены нарушение физиологического соотноше­ния между классами и типами иммуноглобулинов, нали­чие парапротеинов, моноклональных антител, снижение peзистентности к бактериальной, микотической и вирусной инфекции.

При обменных поражениях печени (функциональная гипербилирубинемия, жировая дистрофия и др.) измене­ния иммунных реакций, опосредованных Т- и В-лимфоцитами, выражены минимально. Статистически достоверного повышения содержания иммуноглобулинов, циркули­рующих иммунных комплексов, аутоантител не отмечается. Обострения хронического холецистита сопровождаются возрастанием числа иммуноглобулинсодержащих клеток непосредственно в слизистой оболочке желчного пузыря, умеренным (не более, чем в 1*1/2 раза) увеличением содер­жания IgG, IgM, IgA в сыворотке, циркулирующих иммун­ных комплексов [Nagura H. et al., 1983]. Встречаются в отдельных случаях антинуклеарные и гладкомышечные антитела в невысоких титрах 1:10-1:20. Отмечено не­существенное угнетение функциональной активности фаго­цитов и Т-лимфоцитов, проявляющееся нерезко выраженным снижением РБТЛ с ФГА, спонтанного Е-РОК, тормо­жением миграции лейкоцитов, снижением фагоцитарного индекса. Однако эти изменения выявляются непостоянно, выражены слабо.

Иммунодиагностика хронических воспалительных за­болеваний кишечника

Хронические воспалительные забо­левания кишечника сопровождаются изменениями функ­циональных свойств иммунокомпетентных клеток, выра­женными в различной степени в зависимости от активно­сти патологического процесса, его распространенности [Tschaikowski К., Jorde W., 1979].

Болезнь Крона характеризуется умеренной гипергаммаи иммуноглобулинемией, повышенной продукцией антител к бактериальным антигенам, прежде всего кишечной па­лочке, пищевым антигенам — белкам молока, яиц, бычье­му сывороточному альбумину, казеину, лактоальбумину, аутологичным антигенам — эпителиальным клеткам ки­шечника. Содержание циркулирующих иммунных комп­лексов повышено умеренно (в 11/2 2 раза), встречаются незначительные изменения концентрации компонентов комплемента, преимущественно СЗ.

Общее число лимфоцитов в периферической крови су­щественно не меняется. В ряде случаев наблюдается сни­жение количества Е-РОК, Т-супрессоров, в то время как число ЕА- и ЕАС-РОК несколько возрастает. Однако эти изменения непостоянны, выражены умеренно [Hodgson H. et al., 1978]. Соотношение Т4+/Т8+ существенно не изме­нено. Спонтанная БТЛ обнаруживается редко. Реактив­ность лимфоцитов к ФГА и кожная чувствительность к ДНХБ незначительно угнетены.

Эпителиоидно-клеточные гранулемы при болезни Кро­на, расположенные в глубоких слоях стенки кишки, состо­ят из макрофагов, лимфоцитов, плазматических клеток [Auer О. et al., 1984]. Число клеток, синтезирующих им­муноглобулины, прежде всего IgA, в слизистой оболочке кишки значительно возрастает и коррелирует с активно­стью процесса. Среди популяции лимфоцитов преоблада­ют В-лимфоциты. Лимфоциты слизистой оболочки кишки активированы, размеры их увеличены, пролиферативная и митотическая активность повышена. Характерной чертой лимфоцитов мезентериальных лимфатических узлов явля­ется их способность лизировать покрытые антителами клетки-мишени. В РБТЛ и РТМЛ наблюдается повышение специфической чувствительности Т-лимфоцитов к бактери­альным, алиментарным и аутологичным антигенам. Карциноэмбриональные антигены, парапротеины, аутоантитела к субклеточным структурам и белкам сыворотки при бо­лезни Крона выявляются редко.

При неспецифическом язвенном колите изменения функциональных свойств иммунокомпетентных клеток весьма сходны с таковыми при болезни Крона [Elster К. et al., 1979]. В периферической крови отмеча­ются непостоянная и незначительная гипергамма- и иммуноглобулинемия, повышение концентрации антибактери­альных антител, иммунных комплексов [Масевич Ц. Г., Бермант Ю. В., 1983]. Содержание циркулирующих лимфо­цитов существенно не изменено, функция Е-розеткообразования несколько снижена. Более выражены местные им­мунные реакции в слизистой оболочке толстой кишки, проявляющиеся плазмоклеточной инфильтрацией, увели­чением числа иммуноглобулинсинтезирующих клеток (в 2—3 раза), изменением их физиологического соотношения. Как и у здоровых лиц отмечается повышение абсолютного числа IgA-синтезирующих клеток, однако их процентное содержание снижается за счет более резкого возрастания числа IgG- и IgM-синтезирующих клеток. У здоровых лиц соотношение IgA : IgG : IgM-синтезирующих клеток со­ставляет 91:5:3,9, при язвенном колите-14:84:1,5. При обострении язвенного колита IgG определяется в клетках эпителия толстой кишки в составе фиксированных иммунных комплексов. Активация комплемента последни­ми способствует цитотоксическому эффекту, повреждению бокаловидных клеток и др. Цитотокоической активностью обладают и лимфоциты. В слизистой оболочке толстой кишки увеличивается число межэпителиальных Т-лимфоцитов, расположенных в непосредственной близости к некротизированным колоноцитам.

Иммунодиагностика целиакии. В перифери­ческой крови больных отмечается непостоянное увеличе­ние содержания иммуноглобулинов, антител к глютену и его фракциям. Число циркулирую­щих Т- и В-лимфоцитов и их функциональная активность существенно не изменены. Локальные изменения непосред­ственно в слизистой оболочке тонкой кишки представле­ны увеличением числа IgA-, IgG- и IgE-синтезирующих клеток, лимфоцитов [Corazza G. et al., 1984J. Последние характеризуются повышенной чувствительностью к глюте­ну, при действии которого наблюдаются БТЛ, увеличение скорости синтеза ДНК и митотической активности.

Поделитесь в социальных сетях:

Добавить комментарий

Ваш e-mail не будет опубликован. Обязательные поля помечены *